Polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု၊ အတိုကောက်အဖြစ်PCRအင်္ဂလိပ်လို၊ တိကျတဲ့ DNA အပိုင်းအစတွေကို ချဲ့ထွင်ဖို့အတွက် အသုံးပြုတဲ့ မော်လီကျူးဇီဝဗေဒနည်းပညာတစ်ခုပါ။၎င်းအား ခန္ဓာကိုယ်အပြင်ဘက်တွင် အထူး DNA ပွားခြင်းအဖြစ် မှတ်ယူနိုင်ပြီး အလွန်သေးငယ်သော DNA ပမာဏကို တိုးပွားစေနိုင်သည်။အတွင်းတစ်ခုလုံးPCRတုံ့ပြန်မှုဖြစ်စဉ်၊ ဒြပ်စင်တစ်မျိုးသည် အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည် - အင်ဇိုင်းများ။
1. Taq DNA
အစောပိုင်းကာလများတွင် စမ်းသပ်မှုများ၊PCRသိပ္ပံပညာရှင်များသည် Escherichia coli DNA polymerase I ကိုအသုံးပြုခဲ့သည်၊ သို့သော်ဤအင်ဇိုင်းနှင့်ပြဿနာတစ်ခုရှိနေသည်- လည်ပတ်မှုလုပ်ဆောင်ချိန်တိုင်းတွင်အင်ဇိုင်းအသစ်များပြန်လည်ဖြည့်တင်းရန်လိုအပ်သည်၊ ၎င်းသည်ခွဲစိတ်မှုအဆင့်ဆင့်ကိုအနည်းငယ်ရှုပ်ထွေးစေပြီးအလိုအလျောက်ချဲ့ထွင်ရန်ခက်ခဲသည်။သိပ္ပံပညာရှင်များသည် 1988 ခုနှစ်တွင် Thermus aquaticus မှ Taq DNA polymerase ကို မတော်တဆ ခွဲထုတ်ပြီးနောက် ဤပြဿနာကို ဖြေရှင်းနိုင်ခဲ့သည်။ ထိုအချိန်မှစ၍ DNA ၏ အလိုအလျောက် ချဲ့ထွင်မှုသည် လက်တွေ့ဖြစ်လာခဲ့သည်။ဤအင်ဇိုင်းကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်းသည်လည်း ဖြစ်စေသည်။PCRနည်းပညာသည် အဆင်ပြေသော၊ လက်တွေ့ကျသော နည်းပညာဖြစ်သည်။လက်ရှိတွင်၊ Taq DNA polymerase သည် DNA kits များတွင် အသုံးအများဆုံး polymerase ဖြစ်သည်။
2. PfuDNA
အထက်တွင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း Taq DNase တွင် ကြီးမားသော bug ရှိသည်၊ ထို့ကြောင့် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် တိကျမှုမရှိသောချဲ့ထွင်မှုကို ရှောင်ရှားရန်အတွက် တိကျသောအသံချဲ့ထွင်မှုကို ရှောင်ရှားရန်အတွက် တိကျသောစမ်းသပ်မှုရလဒ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။သို့သော် Taq DNA polymerase ၏ပြုပြင်မွမ်းမံမှုသည်အခန်းအပူချိန်တွင် DNA polymerase ၏လုပ်ဆောင်မှုကိုတားဆီးနိုင်သည်။PfuDNA polymerase သည် Taq DNA polymerase ၏ အထက်ဖော်ပြပါ အားနည်းချက်များအတွက် ကောင်းမွန်စွာ ဖန်တီးနိုင်သည်၊ သို့မှသာ PCR တုံ့ပြန်မှုကို ပုံမှန်အတိုင်း လုပ်ဆောင်နိုင်ပြီး ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇချဲ့ထွင်မှု၏ အောင်မြင်မှုနှုန်းကို ထိထိရောက်ရောက် မြှင့်တင်နိုင်ပါသည်။
3. Reverse Transcriptase
Reverse transcriptase ကို 1970 ခုနှစ်တွင် ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။ ဤအင်ဇိုင်းသည် RNA ကို နမူနာအဖြစ်၊ dNTP အလွှာအဖြစ် အသုံးပြုကာ အခြေခံတွဲချိတ်ခြင်း၏ နိယာမကို လိုက်နာကာ 5′-3′ ဦးတည်ချက်တွင် RNA နမူနာပုံစံနှင့် ပေါင်းစပ်ထားသည့် DNA တစ်ခုတည်းကြိုးမျှင်တစ်ခုကို ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်သည်။Reverse transcriptase သည် DNA သို့မဟုတ် RNA ပုံစံများမှ DNA polymerase လုပ်ဆောင်မှုအပေါ် အဓိကမူတည်သောကြောင့် 3′-5′ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက် မရှိပါ။သို့သော်၊ ၎င်းတွင် RNase H လုပ်ဆောင်ချက်ပါရှိပြီး၊ ပြောင်းပြန် transcriptase ၏ပေါင်းစပ်မှုအတိုင်းအတာကို အတိုင်းအတာတစ်ခုအထိ ကန့်သတ်ထားသည်။wild reverse transcriptase ၏ သစ္စာရှိမှုနှင့် အပူချိန်နိမ့်ကျမှုကြောင့် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် ၎င်းကို ပြုပြင်ခဲ့သည်။
ဘို့PCRစမ်းသပ်မှုများ၊ အဓိကစားသုံးနိုင်သောပစ္စည်းများမှာ- တစ်ဦးချင်း PCR tube၊ 4/8-strip PCR tube၊ PCR plates များဖြစ်သည်။
Labio ၏PCR စားသုံးနိုင်သောပစ္စည်းများအောက်ပါတို့ရှိသည်။အားသာချက်များ:
PCR ပြားများ: ကျယ်ပြန့်သောအပူစက်ဘီးစီးသူနှင့်လိုက်ဖက်မှု;မြင့်မားသော ခြားနားမှု ၊ လွယ်ကူသော ကောင်းမွန်စွာ ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်း၊well fluorescence reflection;ကောင်းတယ်။အပူလွှဲပြောင်း;လက်မှတ်ရ DNase၊ RNase၊ DNA၊ PCR inhibitors နှင့် pyrogen ကင်းစင်ကြောင်း စမ်းသပ်ထားသည်။
တစ်ဦးချင်းစီ PCR ပြွန်: အငွေ့ပျံခြင်းကိုခံနိုင်ရည်ရှိပြီး ကောင်းမွန်သည်။အပူလွှဲပြောင်း;အလွန်ကောင်းမွန်သော အလင်းအမှောင် ကြည်လင်ပြတ်သားမှု၊ လက်မှတ်ရ DNase၊ RNase၊ DNA၊ PCR inhibitors နှင့် စမ်းသပ်ထားသော pyrogen ကင်းစင်သည်။
PCR ပြွန် 4/8 စင်း: အလွန်ပါးလွှာသော နံရံများ၊ ကြည်လင်ပြတ်သားမှု မြင့်မားသော၊ ကောင်းမွန်သော အလင်းရောင် ရောင်ပြန်ဟပ်မှု၊ဆေးဝါးလုပ်ငန်း၊ အစားအသောက်လုပ်ငန်းနှင့် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ၊ အရည်အသွေးမြင့်၊ အပျိုစင် PP ပစ္စည်း၊ လက်မှတ်ရ DNase၊ RNase၊ DNA၊ PCR inhibitors နှင့် စမ်းသပ်ထားသော pyrogen ကင်းစင်ခြင်းများတွင် အသုံးပြုနိုင်သည်။
စာတိုက်အချိန်- ဇွန်လ-၀၉-၂၀၂၃